细胞系与细胞株的概念

一、细胞系（CellLine）原代培养舞经传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系（LineageofCells）所组成。二、细胞株（CellStrain）通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株（finitecellstrain）;如果可以连续传代,称为连续细胞株（continuouscellstrain）。对于人类肿瘤细胞,在...

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干细胞培养步骤

1、扩增：不同的干细胞，其扩增方法不同。如造血干细胞为悬浮培养，而肿瘤干细胞则为贴壁培养的细胞。2、消化：根据细胞耐受性的不同，有多种方法，如机械法，化学法，以及胶原酶、胰酶消化等不同方法。3、冻存：取处于对数期的干细胞,消化,并吹打为单细胞悬液,用2X培养基重悬细胞后，将等体积DMSO逐滴加入细胞悬液中，轻轻吹打混匀，重悬细胞于冻存管中，并置于冻存盒中，冻存盒放入-80℃冰箱。4、分化：鉴定干细胞的一项重要指标就是它的分化能力。一般分化采取加入细胞因子诱导、共培养、小分子刺...

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细胞培养用耗材污染与防治

一、培养用液1、未灭菌的试剂：高压或过滤除菌。2、物品储放区不洁：经常清洁并作灭菌处理。3、消毒过程不标准：检查高压灭菌器是否工作正常；过滤后检查滤膜是否破裂；灭菌后的液体仍需做无菌试验。4、一次性无菌用品不合格：进行质量检测或更换供应商。二、取材1、原代组织来源有污染，不要把动物带入培养室处理；2、可能有污染的组织应在酒精中浸泡30s－1min，在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、储存时灰尘或细菌孢子进入－一消毒后的器皿应严密包裹，置于无菌物品放置区；未包裹物品放...

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细胞的两种运输方法

一、冻存运输使用干冰置于塑料泡沫盒中，处理得当，可以保存3天。一旦出现融解，细胞活力将急剧下降。将细胞冻存管严密包裹，所用塑料泡沫盒应该不小于300×300×300mm，壁的厚度约为50mm，内部空间为200×200×200mm，这样大的空间需放入5kg干冰。以zui快的速度将细胞从液氮转入干冰中，否则细胞将以10～20℃／min的速度升温。不能让温度高于－50℃。到达目的地后，即可按常规复苏处理。二、活细胞运输细胞应该处于对数生长期早期或中期，状态良好。如果细胞密度过大，培...

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生化试剂的类型概述

一、按剂型分类1、液体试剂①R1和R2分开保存,延长稳定性；瓶间差小，没有复溶时水质引起的差异，使用方便；②可较*排除样品空白和内外源干扰物。2、干粉试剂将各组份溶于液体中分装再冻干，或用球磨粉碎、或混合后打成片剂，用前再加入量的缓冲液使其溶解（称复溶）。二、按试剂组成分类1、单试剂①优点：操作简便适用于各类生化分析，节约试剂位。②缺点：配方复杂（稳定剂），稳定性，不能*避免内外源物质干扰。2、双试剂①优点：可较*排除样品空白和内外源干扰物，试剂稳定，便于储存，运输和使用，可...

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细胞复苏的方法改进

一、背景细胞存储于-170°以下的液氮罐中，在细胞复苏时需要快速地将细胞冻存管放入37°水浴锅中快速升温至37°避免对细胞造成损伤。在复苏过程中冻存管需要用手拿着在摇晃，一个人同时只能拿2-4管，当复苏较多的细胞时一个人就无法操作，这给复苏细胞带来了极大的不便。二、方法改进采用一个装15ml离心管的泡沫板制作一个冻存管托盘，其托盘为：将其底部穿通，孔够冻存管的大小相当，使冻存管放入恰好卡住；在托盘中间插一个杆作为手柄。在复苏时将冻存管放在泡沫板托盘上，手拿着托盘手柄，将载有冻...

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冻存细胞解冻步骤及注意事项

一、冻存细胞解冻步骤1、将细胞冻存管从加有液氮的保温桶中用镊子夹牢，快速在37度水浴锅中摆动，使冻存液迅速解冻融化。注意在这过程中尽量使冻存管盖位于水面上。2、待冻存管中大部分内容物已呈液态时，将冻存管表面消毒后移入生物安全柜。二、注意事项1、在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动冻存管，使之尽快通过zui易受损的温度段（-5～0℃）。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。2、从液氮罐中取出冻存管，有时因冻存管未封严，浸入了液氮，取出后因冻存管内液氮迅...

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生化试剂的校准与结果溯源性

酶的校正要满足在同一方法学、同一测定条件、与理论计算的FACTOR值差异不大，没有发现有明显影响因素，方可进行校正。检验结果溯源性，得建立一个可靠的参考系统作为准确性基础，然后将准确性转移到常规方法测定中去，使常规方法测定结果可溯源到参考系统所提供的准确性基础上来。在实现溯源性目标过程中，永远以患者新鲜标本为实验对象，以方法学对比试验方法为验证手段。方法学对比试验常采用回归方程进行统计分析，假如斜率接近1，截距较小，这意味着实验室常规方法对标本测定结果和溯源目标参考系统对标本...

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