饲养层细胞的培养

一、主要实验材料

1、培养液为F-DMEM。

2、小鼠周龄为7～8w的性成熟母小鼠和周龄为8w的种公鼠。

二、小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的培养

1、小鼠胚胎的准备

①性成熟母小鼠与种公鼠按1公（♂）:2母（♀）比例合笼。

②每天早上观察母小鼠阴道口。有乳白色或蛋黄色冻胶状物（阴道栓）即确定为怀孕。

④见栓当天上午定为怀孕的0.5d。

③取怀孕12.5～14.5d母鼠,断颈处死，无菌条件下暴露子宫。馊用镊子提起近子宫颈端,分离子宫系膜,剪断子宫角。

⑤取出整个子宫,在无菌滤纸上吸干血迹,置于有PBS或无血清DMEM平皿内。用PBS洗涤三次,弃除表面残余血迹。

⑥沿子宫系膜侧剪开子宫,取出带有胎膜的胚胎,置于另一盛有PBS或无血清DMEM平皿内,充分洗涤,弃除表面红细胞。

⑦用小镊子撕破胎膜,取出胎鼠,弃除胎膜,用PBS洗涤三次。

⑧去除胚胎头部、内脏和四肢，将躯干部置于另一盛有PBS或无血清DMEM平皿内,用PBS至少洗涤三次,充分弃除红细胞。

2、小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）的培养


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