细胞培养室的环境要求

细胞生长要求严格的无毒无污染环境，因此必须注意培养室的清洁卫生，保持操作空间的无菌条件。1、培养室应为独立、封闭的空间。培养室及缓冲间都应保持整洁，不要随意出入；2、保持超净工作台的无菌环境，每次使用前打开紫外灯照射消毒15—30分钟；每次使用后将废弃物清理干净，各用具规放整齐，用70%酒精擦净台面，再打开紫外灯照射30分钟以上；3、定期擦洗桌面、地板、清洁培养室，并用0.1%的新洁尔灭溶液消毒；定期打开培养室的大紫外灯，将整个房间进行照射消毒；4、每次打开培养箱前，或手伸入...

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主流产品的表面处理方式

一、康宁Corning1、标准TC处理：培养瓶、培养板、培养皿为大气下等离子体处理，滚瓶和培养管为真空等离子体处理，处理的表面带负电，增加氧原子含量。2、CellBIND处理：是指微波等离子处理，处理效果更好，更亲水。二、BD1、BDFalcon处理：为真空等离子处理。2、BDPrimaria处理：为真空等离子体加入氧气和氨气混合气体处理，使表面有含氧和含氮基团。三、Nunc：表面处理专家1、PolySorp：对疏水性分子具有高亲和力。2、MediSorp：化学性介于Poly...

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细胞系与细胞株的概念

一、细胞系（CellLine）原代培养舞经传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系（LineageofCells）所组成。二、细胞株（CellStrain）通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株（finitecellstrain）;如果可以连续传代,称为连续细胞株（continuouscellstrain）。对于人类肿瘤细胞,在...

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干细胞培养步骤

1、扩增：不同的干细胞，其扩增方法不同。如造血干细胞为悬浮培养，而肿瘤干细胞则为贴壁培养的细胞。2、消化：根据细胞耐受性的不同，有多种方法，如机械法，化学法，以及胶原酶、胰酶消化等不同方法。3、冻存：取处于对数期的干细胞,消化,并吹打为单细胞悬液,用2X培养基重悬细胞后，将等体积DMSO逐滴加入细胞悬液中，轻轻吹打混匀，重悬细胞于冻存管中，并置于冻存盒中，冻存盒放入-80℃冰箱。4、分化：鉴定干细胞的一项重要指标就是它的分化能力。一般分化采取加入细胞因子诱导、共培养、小分子刺...

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细胞培养用耗材污染与防治

一、培养用液1、未灭菌的试剂：高压或过滤除菌。2、物品储放区不洁：经常清洁并作灭菌处理。3、消毒过程不标准：检查高压灭菌器是否工作正常；过滤后检查滤膜是否破裂；灭菌后的液体仍需做无菌试验。4、一次性无菌用品不合格：进行质量检测或更换供应商。二、取材1、原代组织来源有污染，不要把动物带入培养室处理；2、可能有污染的组织应在酒精中浸泡30s－1min，在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、储存时灰尘或细菌孢子进入－一消毒后的器皿应严密包裹，置于无菌物品放置区；未包裹物品放...

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细胞的两种运输方法

一、冻存运输使用干冰置于塑料泡沫盒中，处理得当，可以保存3天。一旦出现融解，细胞活力将急剧下降。将细胞冻存管严密包裹，所用塑料泡沫盒应该不小于300×300×300mm，壁的厚度约为50mm，内部空间为200×200×200mm，这样大的空间需放入5kg干冰。以zui快的速度将细胞从液氮转入干冰中，否则细胞将以10～20℃／min的速度升温。不能让温度高于－50℃。到达目的地后，即可按常规复苏处理。二、活细胞运输细胞应该处于对数生长期早期或中期，状态良好。如果细胞密度过大，培...

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生化试剂的类型概述

一、按剂型分类1、液体试剂①R1和R2分开保存,延长稳定性；瓶间差小，没有复溶时水质引起的差异，使用方便；②可较*排除样品空白和内外源干扰物。2、干粉试剂将各组份溶于液体中分装再冻干，或用球磨粉碎、或混合后打成片剂，用前再加入量的缓冲液使其溶解（称复溶）。二、按试剂组成分类1、单试剂①优点：操作简便适用于各类生化分析，节约试剂位。②缺点：配方复杂（稳定剂），稳定性，不能*避免内外源物质干扰。2、双试剂①优点：可较*排除样品空白和内外源干扰物，试剂稳定，便于储存，运输和使用，可...

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细胞复苏的方法改进

一、背景细胞存储于-170°以下的液氮罐中，在细胞复苏时需要快速地将细胞冻存管放入37°水浴锅中快速升温至37°避免对细胞造成损伤。在复苏过程中冻存管需要用手拿着在摇晃，一个人同时只能拿2-4管，当复苏较多的细胞时一个人就无法操作，这给复苏细胞带来了极大的不便。二、方法改进采用一个装15ml离心管的泡沫板制作一个冻存管托盘，其托盘为：将其底部穿通，孔够冻存管的大小相当，使冻存管放入恰好卡住；在托盘中间插一个杆作为手柄。在复苏时将冻存管放在泡沫板托盘上，手拿着托盘手柄，将载有冻...

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