白介素5受体（可溶性）ELISA KIT
白介素5受体（可溶性）ELISA KIT是用于定量检测生物样本中可溶性白介素 5 受体含量的工具，在科研领域发挥着重要作用，有助于深入了解免疫调节、炎症反应等生理病理过程。以下从多方面为你介绍：
检测原理：运用双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）技术。试剂盒的酶联板预先包被了针对可溶性白介素 5 受体的特异性抗体。当加入样本后，样本中的可溶性白介素 5 受体与固相抗体特异性结合。接着加入酶标记的抗可溶性白介素 5 受体抗体，其与已结合在固相抗体上的受体形成 “固相抗体 - 可溶性白介素 5 受体 - 酶标抗体" 复合物。经过充分洗涤，去除未结合的物质，然后加入底物溶液（如 3,3',5,5'- 四甲基联苯胺，即 TMB）。在酶标抗体中酶的催化下，底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中可溶性白介素 5 受体的含量成正比。通过酶标仪在特定波长（通常为 450nm）下测量吸光度，与标准曲线进行对比，即可计算出样本中该受体的浓度 。
试剂盒组成
酶联板：有 96 孔或 48 孔的规格，已预包被抗可溶性白介素 5 受体抗体，是反应的载体。
标准品：通常为冻干品，一般配备 2 瓶。临用前需用标准品稀释液进行复溶，并稀释成不同浓度梯度，例如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL 等，用于绘制标准曲线 。
样本xi释液：用于稀释浓度过高的待测样本，确保样本浓度处于试剂盒的有效检测范围内 。
酶标抗体：即 HRP（辣根过氧化物酶）标记的抗可溶性白介素 5 受体抗体，为浓缩液，使用时需按要求用酶标抗体稀释液进行稀释 。
酶标抗体稀释液：专门用于稀释酶标抗体 。
底物溶液：如 TMB 底物，可与酶标抗体中的 HRP 发生反应，从而产生颜色变化 。
洗涤液：一般为浓缩液，使用时需按一定比例用蒸馏水或去离子水稀释，用于洗涤酶联板，去除未结合的物质，降低背景干扰 。
终止液：多为强酸溶液（如硫酸），用于终止底物的显色反应，使反应液颜色稳定，便于读数 。
封板膜：在温育过程中覆盖酶联板，防止液体蒸发和外界污染 。
使用说明书：详细介绍试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等 。
样本要求
血清：采集血液后，室温放置 2 小时或 4℃过夜，随后以 1000×g 离心 20 分钟，取上清备用。采血应使用无热原、无内毒素的一次性器材 。
血浆：可用乙二胺四乙酸（EDTA）、肝素等作为抗凝剂。样本采集后 30 分钟内，在 2 - 8℃下以 1000×g 离心 15 分钟，取上清 。
细胞培养上清：将细胞培养上清以 1000×g 离心 20 分钟，去除细胞碎片和杂质后，取上清用于检测 。
组织匀浆：用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS，0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液。剪碎组织后，按照约 1:9（w/v）的比例加入 PBS，在冰上充分研磨。再经 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清用于检测 。
样本采集后若短期内检测，可保存于 4℃；若需长时间保存，需置于 - 20℃或 - 80℃冻存，且要避免反复冻融，溶血样本一般不适合检测 。
操作流程
准备工作：从冰箱取出试剂盒，提前 30 分钟使其平衡至室温。同时，将浓缩洗涤液按要求比例用蒸馏水或去离子水稀释备用 。
加样：设置空白孔、标准品孔和样本孔。空白孔加入样本xi释液，标准品孔加入不同浓度的标准品，样本孔加入处理好的样本，每孔加样量通常为 100μL，轻轻混匀，37℃温育 90 分钟 。
洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液加满各孔，浸泡 1 - 2 分钟后甩干，重复洗涤 5 次，确保che底洗净未结合物质 。
加酶标抗体：每孔加入 100μL 稀释好的酶标抗体工作液，37℃温育 60 分钟 。
再次洗涤：重复上述洗涤步骤 。
显色：每孔加入 90μL 底物溶液，轻轻混匀，37℃避光显色 15 - 30 分钟（需根据实际显色情况判断） 。
终止反应：每孔加入 50μL 终止液，此时溶液颜色由蓝色变为黄色 。
读数：在加终止液后 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长处测量各孔的吸光度（OD 值） 。
计算结果：以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样本的 OD 值从标准曲线中查出对应的浓度，若样本进行了稀释，需乘以相应的稀释倍数，从而得到实际浓度 。
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更新时间：2025-03-11
厂商性质：生产厂家
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