精准检测人蛋白S：试剂盒标准化操作流程与干扰因素辨析

　　人蛋白S检测试剂盒多采用双抗体夹心ELISA法，其标准化操作流程如下：

　　样本采集与处理：血清样本需用无热原、无内毒素试管采集，室温静置后离心取上清；血浆样本推荐使用EDTA抗凝，离心后取上清；组织匀浆需用预冷PBS匀浆后离心；细胞培养上清需离心去除杂质。所有样本离心后若不能立即检测，需分装冻存于-20℃，避免反复冻融。

　　试剂准备：试剂盒从2-8℃取出后室温平衡20-30分钟，浓缩洗涤液按说明书稀释，标准品用标准品稀释液倍比稀释至指定浓度，生物素化抗体和酶结合物工作液需临用前15分钟配制。

　　加样与温育：设空白孔、标准孔和待测样品孔，空白孔不加样品及酶标试剂，标准孔加标准品，待测样品孔先加样品稀释液再加样品，加样时避免触及孔壁，轻轻晃动混匀后封板，37℃温育30-90分钟。

　　洗涤与显色：温育后弃去液体，洗涤液洗涤5次，拍干后加酶结合物工作液，再次温育后洗涤，加底物A、B液避光显色15分钟，加终止液终止反应。

　　结果判定：用酶标仪在450nm波长测定OD值，根据标准曲线计算样品浓度，若样本OD值高于标准品最高值，需稀释后重新测定。

　　干扰因素辨析：

　　样本因素：溶血、高血脂样本会影响检测结果，需离心去除杂质；反复冻融会导致蛋白降解，应避免。

　　试剂因素：不同批号试剂不得混用，浓缩洗涤液结晶需加热溶解后使用，底物需避光保存。

　　操作因素：加样时间过长、温育时间不足或温度不恒定、洗涤不等均会影响结果准确性，需严格控制操作流程。