细胞的冻存操作

一、用品

1、5%胰蛋白酶

2、含10%~20%血清培养液

3、DMSO或无色新鲜甘油（15磅蒸汽高压消毒）

4、吸管、离心管、冻存管

二、操作步骤

1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但是对数生长期的细胞，已将长满的细胞冻存后生存率低。在冻存前一天换一次培养液。

2、用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生生长的细胞则不需要处理。依据传代方法把消化好的细胞收集于离心管并计数，离心。

3、去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入配好的冻存培养液（含10%的DMSO或甘油），冻存液中细胞的zui终密度为5*10^6/mL~1*10^7/mL。用吸管轻轻地吹打使细胞均匀，然后分装入无菌冻存管中。

4、装完细胞后的冻存管即可直接冻存。


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